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恶性肿瘤向邻近的组织侵犯称为侵袭。检测肿瘤侵袭能力是判断肿瘤转移能力的一种方法。

原理
Transwell小室置于24孔的培养板中，分为上下室，上室底部为一层聚碳酸酯膜，这层膜具有通透性，将上室培养液和含下室培养液隔开，但是肿瘤细胞可以通过，下室中的培养液（如血清中的趋化因子）可以吸引上室中的细胞。

用途
利用transwell侵袭验可以检测肿瘤细胞的侵袭能力。

材料与仪器
步骤
1、验前准备：
（1）细胞比较好在前一天进行饥饿处理（即血清培养基培养1个晚上，增强细胞迁移能力）。
（2）在4℃过夜融化Matrigen胶，验前转移到冰盒中。
（3）将tip头、EP管道、放有Transwell小室的24孔板和血清培养基提前4℃预冷，验前转移到冰盒中。
2、基质胶铺板:
（1）稀释Matrigen胶：先将8μLMatrigen胶加入64μL预冷的血清培养基（推荐1:8的比例稀释），然后用tip头吹打充分混匀。
（2）均匀铺胶：吸取60μL稀释后的Matrigen胶，垂直加入Transwewll上室中，均匀平铺在底部。铺胶过程不要产生气泡
（3）凝胶，Matrigen胶放入培养箱（37℃，5%CO2）中孵育1~3h聚合成薄膜
（4）基底膜水化，将上室中多余液体吸掉，在每孔中加入100μL血清培养基后，于培养箱放置30min。
3、收集细胞，离心去上清，用血清培养基重悬细胞，计数。不同细胞大小和侵袭能力不同，可设置浓度梯度以达到比较佳验结果。每组细胞的配制：每组3复孔。以每孔105个细胞200μl的量配制4个复孔的用量（多配1孔）为例，即4×105个细胞800μl。
4、transwell下室加入700~800μl的含10%~20%胎牛血清的完全培养基，上室加入（3）中配制好的200μl细胞。
5、细胞培养箱中培养24~48小时，具体需要预验摸索下，每种细胞侵袭能力不一致。
6、固定。4％多聚甲醛室温30分钟，结晶紫染液室温染色30分钟，适当风干后，拍照，计数，并进行统计学分析。

注意事项
1、验前准备必须要充足，比如4℃过夜融化Matrigen胶，将tip头、EP管道、放有Transwell小室的24孔板和血清培养基提前一晚置于4℃预冷。
2、处理transwell小室时，动作轻柔，不可暴力吹打。
3、避免产生气泡。
4、铺胶一定要均匀
5、有血清培养基标注清楚，不要用反。

常见问题
1、用棉签擦上室细胞时，容易蹭到已经穿过去的细胞，要小心操作。
2、将transwell小室放入24孔板中，接触面出现气泡。
3、细胞状态要好，不然可能不发生迁移
4、细胞接种量的问题，太多太少都会影响验结果，建议做个浓度梯度的预验。
5、检测时间点的选择，也需要进行预验。


来源：丁香验